目的：添加转化生长因子β1 (TGF-β1)以及与内脏内胚层样END-2细胞共培养定向诱导鼠胚胎干细胞ESCs (Embryonic Stem Cells)分化,探索联合使用化学诱导法与共培养法对ESCs的心肌细胞定向诱导分化作用。方法：用鼠胚成纤维细胞MEF(mouse embryonic fibroblasts)作为饲养层促ESCs增殖并抑制其分化,先将ESCs悬浮培养形成2~3天前拟胚体Pre-EBs(Pre-embryoid Bodies),再向培养液添加TGF-β1或(和)将2~3天Pre-EBs与END-2细胞或END 2细胞条件培养液共培养。 自然分化为对照组。相差悬微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋(Actin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。用AnnexinⅤ/PI双染后,在流式细胞仪上检测ESCs分化过程中的调亡情况。将分化的心肌细胞用DAPI标记,移植入Yorkshire猪的心脏,4 W后检测是否与宿主细胞形成稳定的联系。结果：向培养液添加TGF-β1或将2~3天Pre-EBs与END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养,各自有42%,69%,67%的胚胎小体出现自发性搏动,均表达心肌细胞特异性蛋白Actin和TnT,以及观察到心肌样超微结构。尤其是联合使用两种诱导方法,自发性搏动的胚胎小体高达92%,搏动区域较单用一种诱导方法组大,且细胞形态较单一。联合诱导组细胞调亡率为20%,高于其它各组。4周后发现移植的心肌细胞与宿主细胞形成稳定的联系,表达特异的连接蛋白Connexion 43。结论：联合使用化学诱导和共培养两种诱导法对ESCs的心肌细胞定向分化有协同作用,诱导分化的
