目的:铁离子标记拟移植的骨髓间质细胞,体外实验评价标记的效率和毒性;然后将标记细胞移植于梗死心肌区,通过磁共振技术寻找一种能够对移植细胞进行在体显像的方法。方法:体外实验部分:从中华小型猪髂骨处抽取骨髓,体外培养扩增骨髓间质细胞。将铁磁性对比剂和骨髓间充质干细胞共同孵育培养48小时。使用普鲁士蓝染色评价铁离子标记的效率,使用MTT比色实验评价标记对细胞生长能力的影响,使用台盼蓝染色检验细胞的活性。体内实验部分:结扎冠状动脉前降支建立猪的心肌梗死
动物(n=15),
动物建立后10天将铁离子标记的自体骨髓间质细胞(1X107细胞/只
动物)通过心外膜注射方法移植到梗死心肌内,通过磁共振检查分别在移植后1天直至4周动态对移植细胞进行成像。另外5只
动物作为对照组,移植未标记的骨髓间质细胞。
动物心脏标本进行普鲁士蓝染色。结果:体外实验部分:铁离子转染后,骨髓间质细胞普鲁士蓝染色阳性率为95%以上,对照组无任何阳性细胞发现。比色实验表明铁磁性标记物未影响细胞增值,台盼蓝染色显示标记后98%的细胞拒染台盼蓝。体内实验部分:实验组细胞注射点均可通过磁共振显像。动态观察显示细胞显像可以持续到移植后4周。病理学检查可以看到移植细胞呈普鲁士蓝染色阳性,并和影像学有很好的一致性。对照组未发现注射点显像和普鲁士蓝染色阳性细胞。结论:铁离子标记可以高效率地标记骨髓间质细胞。而且无毒, 不影响细胞生长和发育。利用磁共振技术, 移植的铁离子标记的细胞可以活体在上较好地持续显像。铁离子标记方法结合磁共振技术为移植细胞的在体示踪和细胞的存留、迁移提供了良好的手段。