目的:动脉壁内纤维蛋白原向纤维蛋白转化与动脉粥样硬化进展、血栓形成及再狭窄密切相关。血管平滑肌细胞由中膜向内膜垂直迁移及增殖是动脉粥样血栓形成及再狭窄发病机制中的关键环节。丝裂原活化蛋白激酶是介导细胞外信号与细胞核反应间信息传递的共同通路与中心环节,关于MAPK信号途径在纤维蛋白对血管平滑肌细胞趋化和移行中的调控作用目前尚未见报道。本实验观察三维纤维蛋白胶对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)的趋化作用及其信号转导机制。
方法:采用胶原酶消化法培养HCASMC,倒置相差显微镜观察其向三维纤维蛋白胶中迁移的能力及ERK、p38、JNK信号通路对其迁移能力的影响。Western Blot检测纤维蛋白对细胞pERK、pp38和pJNK表达的调控。
结果:①CASMC 经SM αactin免疫荧光染色呈阳性。倒置显微镜下可见明显"峰谷"样生长。HCASMC具有自发生长特性,在无血清DMEM培养条件下可存活数周。向纤维蛋白胶中迁移的HCASMC呈长梭型,细胞数量增加时形成环形管腔样结构。②分别以0.8、1.6、3.2、6.4 g/L 纤维蛋白原与0.5 U/mL凝血酶制备纤维蛋白胶,以单纯琼
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