目的 本研究利用蛋白质双向凝胶电泳技术比较正常人、2型糖尿病患者脂肪组织蛋白质表达谱的差异,质谱分析确定差异蛋白种类,从而进一步明确2型糖尿病病因,可能为2型糖尿病的药物治疗提供新的靶点。
方法 按照1998 WHO公布的糖尿病诊断标准选择2型糖尿病患者及正常对照,两者年龄、性别相匹配,取其内脏脂肪组织冻存。用去垢剂裂解、研磨、超声裂解相结合的方式抽提脂肪组织蛋白,Brad-ford法蛋白初步定量。PROTEAN IEF CELL(Bio-Rad) 等电聚焦仪进行双向凝胶电泳的第一向-等电聚焦,12%聚丙烯酰胺凝胶电泳进行第二向分离。经过与质谱相匹配的硝酸银染色后,得到2型糖尿病患者和正常对照的脂肪组织蛋白双向凝胶电泳图。molec ular imager FX Pro Fluorescent imaging system 将电泳图扫描成像,PD-Quest 软件分析图像寻找有意义的差异表达蛋白点。从中选出10个差异最为显著的蛋白点,割点进行质谱分析。
结果 PD-Quest 软件分析:两组织蛋白双向凝胶电泳图大部分蛋白点匹配 (r=0.74)。 糖尿病患者较正常人蛋白表达谱中有42个蛋白点表达升高(2倍以上),其中升高4倍以上的有17个点,表达下调2倍以上的有72个蛋白点,其中下调4倍以上的有32个点。质谱结果有两个差异蛋白为未知蛋白,另两个分别与硫氧还蛋白(TRX)和lipin有同源性。
结论 近年来发现了脂肪组织的内分泌功能,其分泌的许多激素类物质在机体的物质能量代谢的调节中起重要作用。脂肪组织是代谢综合症、2型糖尿病研究中越来越
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