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活体细胞内蛋白激酶A对人类甾体生成因子-1亚核分布模式的影响

作者:范吴强 出处:上海第二医科大学附属仁济医院

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目的 通过观察活体细胞内甾体生成因子-1(SF-1,steroidogenic factor-1,以下统称SF-1) 的亚核分布模式,分析蛋白激酶A (以下统称PKA)对SF-1的亚核分布模式的影响, 从而探索目前未知的关于PKA如何增强SF-1转激活能力的机制。

方法 克隆全长野生型以及G35E突变型人SF-1 cDNA,并将他们与绿色荧光蛋白(以下统称GFP)融合。在确认融合后,将G FP-SF-1融合质粒转染到细胞内,并用激光共聚焦荧光显微镜来观察GFP-SF-1的亚细胞分布模式,探查PKA对后者的影响。

结果 与SF-1相比较, GFP-SF-1融合蛋白的转激活能力得到高度保留。在没有PKA激活的条件下GFP-SF-1呈均匀弥散状分布在细胞核内,但有PKA激活时,GFP-SF-1聚集成小点(以下统称foci)状分布。突变型GFP-SF-1(G35E)无论PKA是否被激活,均呈弥散状分布于核浆内(nucleoplasma),但我们意外地发现G35E突变型SF-1在核仁内有斑点状聚集现象。

结论 GFP在激光的激发下能发出肉眼可见的荧光,把核内受体蛋白与GFP融合后再给予激光激发即可直接在显微镜下观察到受体。这是目前研究核内受体功能的重要方法。我们作了GFP与野生型SF-1的融合蛋白GFP-SF-1-WT以及GFP与突变型(G35 E)SF-1的融合蛋白GFP-SF-1-M,并观察了他们的亚核分布,发现PKA可以诱导GFP-SF-1-WT 重组其核内分布模式而形成foci(注:foci形成是普通核内受体(如AR)被配体激活(如DH

发布人:onetwofree 发布时间:2005年2月22日
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