目的 胰岛淀粉样纤维(islet amyloid fibril,IAf)是胰岛淀粉样多肽(is let amyloid polypeptid,IAPP)的纤维状态,本实验从膜流动性、〔Ca2+〕I变化及膜离子通道改变着手,探讨IAf对胰岛细胞的膜毒性作用及可能机制,为IAPP在2型糖尿病胰岛细胞损伤中的作用提供部分实验依据。
方法 分别将设定好浓度梯度的可溶性IAPP组和IAf组孵化体外培养的胰岛细胞,用荧光偏振法测各组细胞的膜流动性,分别与空白对照组比较;粘附细胞仪(ACAS)记录上述各浓度组刺激后〔Ca2+〕i的动态变化,ACAS记录的荧光 强度和到达 荧光强度的时间作为〔Ca2+〕i变化的指标,分别与空白对照组比较;另设立浓度1 0μM Iaf刺 激组为对照组,设立Ca2+通道阻断剂组、无Ca2+培养液组、胆固醇干预组共3个预处理组, 加10μM IAf后用ACAS观察〔Ca2+〕i的动态变化,分别与对照组比较,进一步了解 〔Ca2+〕i变化是否与钙离子通道有关。
结果 细胞膜流动性和〔Ca2+〕i在IAf各浓度组中呈剂量依赖性升高,与可溶性IAPP组及空白对照组有显著性差异(P<0.001);而可溶性IAPP组与空白对照组间差异不明显(P>0.05)。Ca2+通道阻断剂预处理组加10μM IAf刺激后〔C a2+〕i变化 与对照组相比无显著性差异(P>0.05),而无Ca2+培养液组和胆固醇预处理组加10 μM IAf 刺激后〔Ca2+〕i变化均明显低于对照组(P<0.001)。
结论 IAf可能通过改变胰岛细胞膜流动性和细胞内
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